液相色譜出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象如何處理？
?
液相色譜中出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象可能由多種原因?qū)е?，以下是常見的原因及相?yīng)處理方法：
1、色譜柱問題
（1）柱頭污染或堵塞
長時間使用后，色譜柱柱頭可能會積累雜質(zhì)，導(dǎo)致樣品在柱內(nèi)的流動不均勻，從而出現(xiàn)雙峰。處理方法是先反沖色譜柱，如果反沖后仍無改善，可以考慮更換柱頭篩板或?qū)ιV柱進(jìn)行再生處理。
補充說明：反沖色譜柱時，需注意反沖的次數(shù)和時間，避免對色譜柱造成進(jìn)一步損傷。一般來說，反沖次數(shù)不應(yīng)超過3-5次，每次反沖時間控制在10-15分鐘。
（2）柱效下降
色譜柱使用時間較長或經(jīng)歷了不當(dāng)?shù)氖褂脳l件，會使柱效降低，引起峰形展寬甚至出現(xiàn)雙峰。此時需要評估色譜柱的性能，若柱效嚴(yán)重下降，可能需要更換新的色譜柱。同時，要注意在日常使用中正確維護(hù)色譜柱，避免過度使用和不當(dāng)操作。
補充說明：可以通過檢查色譜柱的理論塔板數(shù)(N)來評估柱效。如果N值顯著低于色譜柱的標(biāo)稱值，說明柱效下降較為嚴(yán)重。
2、樣品問題
（1）樣品過載
進(jìn)樣量過大，超過了色譜柱的承載能力，會使色譜峰出現(xiàn)前延或拖尾，嚴(yán)重時可能分裂為雙峰。解決辦法是減少進(jìn)樣量，或者稀釋樣品濃度，使進(jìn)樣量在色譜柱的線性范圍內(nèi)。
補充說明：可以通過逐步減少進(jìn)樣量，觀察峰形變化，確定合適的進(jìn)樣量范圍。
（2）樣品分解或變質(zhì)
樣品在進(jìn)樣前可能發(fā)生了分解或變質(zhì)，產(chǎn)生了與目標(biāo)化合物保留時間不同的雜質(zhì)，從而出現(xiàn)雙峰。需要重新制備新鮮的樣品，并確保樣品在儲存和處理過程中保持穩(wěn)定，必要時添加適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑。
補充說明：可以通過對比新鮮樣品和儲存樣品的色譜圖，確定是否因樣品變質(zhì)導(dǎo)致雙峰。
（3）樣品溶劑與流動相不匹配
如果樣品溶劑的強度比流動相大很多，會導(dǎo)致樣品在柱內(nèi)的擴(kuò)散行為異常，出現(xiàn)雙峰。應(yīng)盡量選擇與流動相組成相似的溶劑作為樣品溶劑，或者采用流動相來溶解樣品。
補充說明：如果無法更換溶劑，可以通過增加流動相中的有機溶劑比例，減少樣品溶劑與流動相之間的差異。
3、儀器問題
（1）進(jìn)樣系統(tǒng)故障
如進(jìn)樣閥漏液、進(jìn)樣針堵塞或進(jìn)樣量不準(zhǔn)確等，都可能影響樣品的正常進(jìn)樣，導(dǎo)致雙峰出現(xiàn)。需要檢查進(jìn)樣系統(tǒng)的各個部件，更換損壞的部件，確保進(jìn)樣系統(tǒng)的正常工作。
補充說明：定期校準(zhǔn)進(jìn)樣系統(tǒng)，確保進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性。如果進(jìn)樣針堵塞，可以使用超聲清洗或更換新的進(jìn)樣針。
（2）檢測器故障
檢測器的光路系統(tǒng)故障、信號采集問題或流通池污染等，都可能導(dǎo)致檢測信號異常，出現(xiàn)雙峰假象?？梢詫z測器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，清潔流通池，檢查光路系統(tǒng)和信號采集裝置，排除檢測器故障。
補充說明：定期檢查檢測器的基線穩(wěn)定性，如果基線漂移或噪聲過大，可能是檢測器故障的信號。
4、流動相問題
（1）流動相組成變化
流動相中的溶劑揮發(fā)、組分沉淀或發(fā)生化學(xué)反應(yīng)等，都可能導(dǎo)致流動相組成發(fā)生變化，影響樣品的保留和分離，出現(xiàn)雙峰。要定期檢查流動相的組成和純度，及時補充或更換流動相，確保流動相的穩(wěn)定性。
補充說明：使用高質(zhì)量的溶劑，并在使用前進(jìn)行過濾和脫氣處理，以減少雜質(zhì)和氣泡的影響。
（2）流動相比例不準(zhǔn)確
梯度洗脫時，流動相比例的不準(zhǔn)確會導(dǎo)致洗脫能力的變化，從而影響峰形。需要檢查輸液泵的精度和混合器的工作狀態(tài)，確保流動相比例的準(zhǔn)確性。
補充說明：定期校準(zhǔn)輸液泵，確保其在梯度洗脫過程中能夠準(zhǔn)確輸送不同比例的流動相。
當(dāng)液相色譜出現(xiàn) “雙峰” 時，需要仔細(xì)排查各個可能的原因，通過相應(yīng)的處理方法逐步解決問題，以恢復(fù)正常的色譜分離效果。
發(fā)布于: 2024-07-16